六年前，科學家針對實時定量PCR實驗中的種種問題，提出了一套統一的評估標準——MIQE指南。兩年前，數字PCR版本的MIQE指南也出爐。然而，認真執行MIQE指南的實驗室并不多。定量PCR標準化，挑戰在哪里？Jeffrey Perkel博士近日在《BioTechniques》上討論了這一問題。

當零基礎的人們準備開展定量PCR時，大多會請教師兄師姐。不過，對于數字PCR（dPCR）這種比較新的技術，周圍的人未必有經驗。同時，這種技術不像傳統PCR那么簡單，需要用到專門的儀器、操作和變量。Perkel認為，若未經培訓的研究人員利用dPCR來定量mRNA的豐度，他們也能獲得一個數字，但這個數字是否能準確代表樣品本身，就不好說了。

幸運的是，一組研究人員已經開發出dPCR實驗的路線圖，稱為digital MIQE指南。這個指南能夠指導研究人員開展dPCR，包括實驗設計和分析。digital MIQE論文的主要作者，LGC公司的首席科學家Jim Huggett表示：“digital MIQE是關于你論文中所包含的信息，這讓我能夠重復你的工作�！�

然而，盡管越來越多的研究人員在實驗中使用dPCR，但采用digital MIQE指南的仍是少數。根據Google Scholar的統計，digital MIQE指南自2013年發表以來被引用74次，而同期發表的dPCR文章超過400篇。同樣，原先的MIQE指南自2009年以來被引用3200次，而qPCR文章超過26,000篇。

這與Nature Methods早期的一項調查一致，說明十篇文章中約有九篇未能提供最低要求的實驗數據，因而有可能包含誤導的結果和結論。那么，研究人員為什么會忽視MIQE指南？羅格斯大學的Andrzej Pietrzykowski認為，許多人并不知道MIQE，而有些人認為采用MIQE指南會帶來額外的工作，也要花費更多的錢。

對于這種現狀，digital MIQE論文的資深作者、英國安格利亞魯斯金大學的Stephen Bustin教授認為，MIQE指南的執行需要期刊編輯的參與。盡管在過去幾年數據重復性的問題引起廣泛討論，但Bustin及其同事發現，MIQE采用率與期刊的影響因子成反比。

不過，Bustin教授也表示，儀器供應商已成為MIQE指南的積極推動者。盡管還沒有MIQE認證的儀器或試劑盒，但許多供應商都在向他們的客戶推廣MIQE指南。例如，Bio-Rad已推出了一個移動app，能實時量化是否符合MIQE。

這些工具可以使研究人員更清楚了解PCR的良好實踐。不過，Huggett認為MIQE可能還面臨觀念的問題。有些人認為這像是專政。Huggett指出，這并不是一套規則，而是建議，其目的是幫助研究人員充分利用他們所有的，以便讓每個反應都有價值。

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